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Acetylen wird am häufigsten in Kombination mit Sauerstoff zum Schneiden oder Schweißen von Materialien wie unlegiertem Stahl verwendet, wobei die Standard-Industriegüte ausreichend ist. Für das Hartlöten oder Schweißen von Blei ist Acetylen mit niedrigem Phosphinanteil erforderlich.
Acetylen wird in der organischen Synthese (Laborarbeit) sowie in der chemischen Synthese eingesetzt. Acetylen dient als Kohlenstoffquelle bei der Herstellung molekularer Strukturen wie Fullerenen; bekannte Beispiele hierfür sind Buckyballs oder Kohlenstoffnanoröhren.
Acetylen wird beim Anbau von Pflanzen eingesetzt; es fördert die Bildung neuer Blüten. Acetylen wird als Bestandteil von Kalibriergasen für die Gas-, Öl- sowie chemische Industrie verwendet.
Acetylen wird in einigen Leuchttürmen noch immer als Lichtbrennstoff verwendet.
Acetylen ist einer der Bestandteile von Atemgasen für Lungenfunktionstests.
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